SOCs和SACs在弥漫性轴索损伤后轴浆钙离子浓度升高中的作用及机制 - Details

Author：

李宇 (李宇.)

Abstract：

研究背景：
弥漫性轴索损伤（DAI）是脑外伤（TBI）中常见并且严重的一种病理损伤类型，DAI从1956年被Strich首次报导以来，其病理、病理生理学方面机制研究的进展颇丰。但另一个方面，在临床上对于DAI患者的治疗仍无突破性的进展。近十多年来，神经领域专家们对DAI后的轴突继发性损伤（ASI）尤为重视，研究表明DAI后ASI涉及轴浆的离子平衡紊乱、轴膜通透性改变、沃勒变性、能量代谢障碍、线粒体损伤、氧化应激损伤以及免疫炎症反应等多种损伤机制，这些继发性损伤机制相互作用相互影响，是最终导致DAI后轴突继发性变性、断裂的关键原因。但在上述诸多引发ASI的病理生理机制中，离子平衡紊乱尤其是钙离子浓度的升高在其中起到的决定性的作用。
尽管几十年来围绕DAI的研究取得了不少进展，但是详尽的DAI后导致轴突变性、断裂的病理生理机制仍不明确。在脑外伤发生过程中，头颅的剧烈加速或减速运动是产生机械应力的始动因素。随后机械应力作用于神经元轴突产生可升高轴浆内的游离钙离子浓度（[Ca2+]axo），持续性升高的[Ca2+]axo是导致轴突继发性变性、断裂的重要中间环节，主要机制涉及钙依赖的蛋白水解酶（calpain）的激活和线粒体损伤机制。目前，对于机械损伤导致[Ca2+]axo升高的机制仍不明确。
研究已经明确证实了机械牵拉可导致轴突[Ca2+]axo迅速、剧烈的升高（初始升高），升高的[Ca2+]axo可活化calpain。进一步，Calpain水解电压依赖的钠离子通道（NaChs），进而导致NaChs功能障碍，引起持续性的Na+内流并导致轴膜持续性的去极化，最终导致电压门控的钙通道（VGCCs）开放，并逆转钠-钙交换体(NCX)的功能，使得Ca2+持续性内流，并导致[Ca2+]axo长时间处于高水平（持续升高）。但是，牵拉是如何导致[Ca2+]axo　“初始升高”　的机制并不明确。牵拉激活的通道（SACs）是一种直接由机械牵拉开放的阳离子通道，是否DAI中应力作用轴突可直接开放SACs从而引起[Ca2+]axo的“初始升高”值得深入研究。另外，有研究报道机械牵拉轴突可释放内质网（ER）的钙离子，而ER的钙释放可激活库容性钙通道（SOCCs），引起库容性钙内流（SOCE）。那么ER钙释放及ER钙释放导致的SOCCs激活在DAI后的作用也在本研究中进行了深入研究和讨论。
本研究中，我们建立了全新的DAI体外模型，使用体外牵拉轴突致伤的方式模拟DAI后轴突的病理生理学变化。基于该模型，我们深入研究了SOCs和SACs在DAI后急性期（＜30min）内[Ca2+]axo升高的作用，以及它们对ASI的影响。并且研究了SOCs相关蛋白STIM1、Orai1和TRPC1的蛋白表达，以及SACs相关蛋白TRPC1、TRPC6、TRPV1和TRPV2的蛋白表达情况。
研究目的：
1.　建立新的DAI体外模型，并对模型进行综合评定。
2.　明确DAI后早期[Ca2+]axo动态变化规律。
3.　明确DAI后轴突ER　钙释放是否存在。
4.　明确SACs和SOCs在结构上、功能上是否存在于轴突中。
5.　明确SACs和SOCs的拮抗剂对DAI后[Ca2+]axo升高及ASI的影响。
6.　综合研究VGCCs、NaChs及SACs在DAI后[Ca2+]axo升高中的相互关系。
研究方法：
1.　模型建立及评定：采用改良的神经元培养方法，将神经元胞体与轴突进行分区培养，并对轴突进行牵拉致伤。通过MAP2、Tau、β-tubulin免疫荧光对神经元培养进行鉴定。通过有限元分析及实际轴突牵拉程度测量的方法得出轴突的理论和实际牵拉程度。通过共聚焦显微镜观察明确损伤后轴突的病理学变化。通过Tau、β-tubulin免疫荧光对损伤后轴突的细胞骨架破坏情况进行研究。通过碘化吡啶（PI）染色对损伤后神经元死亡的进行研究。
2.　通过Fluo-4　AM及CTR共聚焦成像，分析损伤后轴突的[Ca2+]axo动态变化规律。通过无钙细胞外液、咖啡因的对[Ca2+]axo的影响明确ER钙释放的发生。　　　
3.　通过免疫荧光、Western　blot检测STIM1、Orai1、TRPC1、TRPC6、TRPV1、TRPV2在神经元轴突上的表达，明确SOCs和SACs在轴突上的表达。
4.　通过CPA（ER　Ca2+-ATP酶抑制剂，可抑制ER摄入Ca2+，从而排空ER）的使用，及SOCs拮抗剂（SKF-96365、Pyr-6、Gd3+）的使用明确SOCs功能上存在于轴突中。
5.　通过SOCs拮抗剂（SKF-96365、Pyr-6）和SACs拮抗剂（GsMTx-4、Gd3+）对损伤后[Ca2+]axo及轴突变性程度的影响，明确SOCs和SACs在DAI中的作用。
6.　通过NaChs拮抗剂（TTX）和VGCCs拮抗剂（nifedipine）的使用，明确NaChs和VGCCs在损伤后[Ca2+]axo升高中的作用。
7.　通过高钾细胞外液激活的[Ca2+]axo的升高斜率的比较，推测SACs特异性拮抗剂GsMTx-4对损伤后轴突极化状态的影响。
研究结果：
1.　改良的神经元培养方法获得的神经元纯度高于90%，轴突聚集区仅轴突存在其中，无树突或神经元胞体的存在。20%及50%牵拉下的有限元分析结果显示最大牵拉均发生在培养皿的中央区域。选择该区域进行实际牵拉程度测量显示：20%牵拉下的轴突实际拉伸程度为14%，50%牵拉下的轴突实际拉伸为42%。50%牵拉（n=42）导致轴突继发性变性发生的程度明显高于20%牵拉（n=28）和假损伤组（n=35）（P＜0.01）。同时50%牵拉可引起轴突细胞骨架（β-tubulin，n=6、Tau，n=6）的连续性中断（P＜0.01，与假损伤组比较，n=6）及伴随明显的神经元坏死（P＜0.01，与假损伤组比较；50%牵拉组n=6；假损伤组n=6）。
2.　50%牵拉损伤后[Ca2+]axo升高。非“串珠样”结构区域的[Ca2+]axo在损伤后30s出现[Ca2+]axo峰值，之后的30min内逐步下降，但仍高于假损伤组（P＜0.01）。“串珠样”结构区域的[Ca2+]axo在损伤后30s升高，并在之后的10min进一步升高并达到峰值。损伤后30min，轴突“串珠样”结构部位的[Ca2+]axo明显高于非“串珠样”结构部位（P＜0.01）。
3.　无钙细胞外液条件下轴突牵拉损伤后30s~30min未引起[Ca2+]axo明显升高（P＞0.05，与假损伤组比较，差异无统计学意义），无钙细胞外液条件下损伤后30min，未引起明显的轴突“串珠样”结构形成（P＞0.05，与假损伤组比较，差异无统计学意义）。损伤后30s，咖啡因引起的[Ca2+]axo升高程度低于假损伤组（P＜0.01，差异有统计学意义）。
4.　STIM1、Orai1和TRPC1表达于轴突中。CPA引发的钙内流存在于轴突中，并可被SOCs拮抗剂抑制（P＜0.01，各拮抗剂组与对照组比较，差异有统计学意义）。
5.　轴突损伤后，SOCs拮抗剂（SKF-96365、Pyr-6）降低了5、10、30min时“串珠样”结构部位的[Ca2+]axo升高（P＜0.01，与损伤组比较，差异有统计学意义）。但未降低个时间点非“串珠样”结构部位的[Ca2+]axo升高（P＞0.05，与损伤组比较，差异无统计学意义）。损伤后30min的STIM1-Orai1及STIM1-TRPC1蛋白的共定位系数及Pearson’s　相关系数均高于假损伤组（P＜0.05，与假损伤比较，差异有统计学意义）。
6.　对于小鼠而言，TRPC6、TRPV2表达于神经元轴突，但TRPV1在轴突中无表达。SACs拮抗剂GsMTx-4和Gd3+均明显抑制了损伤后各时间点的[Ca2+]axo升高和轴突“串珠样”结构形成（P＜0.01，与损伤组比较，差异有统计学意义）。
7.　TTX和Nifedipine明显抑制了损伤后各时间点的[Ca2+]axo升高（P＜0.01，与损伤组比较，差异有统计学意义）。
8.　损伤后30s，损伤组轴突在高钾外液下的[Ca2+]axo升高程度降低（P＜0.05，与假损伤组比较，差异有统计学意义）。GsMTx-4治疗组在损伤后30s给予高钾外液，激活的[Ca2+]axo升高程度高于损伤组（P＜0.01，与损伤组比较，差异有统计学意义），与假损伤组比较无差异（P＞0.05，与假损伤组比较，差异无统计学意义）。
研究结论：
1.　通过机械牵拉轴突的方法制作的DAI体外模型可靠。与20%牵拉相比，50%牵拉造成的轴突的继发性变性、断裂效率更优，同时符合临床DAI的各项病理生理变化。
2.　DAI造成的[Ca2+]axo升高并不均一，“串珠样”结构内[Ca2+]axo升高更为剧烈和持久。
3.　DAI可引起轴突ER　Ca2+　释放。
4.　SOCs在蛋白表达上及功能上均存在于小鼠神经元轴突部位。SOCs参与了DAI后轴突“串珠样”结构内[Ca2+]axo升高，但SOCs拮抗剂未能对ASI有保护作用。
5.　SACs在蛋白表达上存在于小鼠神经元轴突部位。同时SACs拮抗剂GsMTx-4和Gd3+均可抑DAI后的[Ca2+]axo升高，并对ASI有保护作用。
6.　NaChs和VGCCs也是牵拉损伤后[Ca2+]axo升高的必要环节。SACs的激活可能是轴突牵拉损伤后[Ca2+]axo升高的起始环节，通过牵拉开放SACs，从而升高膜电位导致轴膜去极化，最终激活NaChs和VGCCs，形成[Ca2+]axo持续性升高并介导ASI。

Keyword：

钙库容性钙通道弥漫性轴索损伤牵拉激活的通道轴突牵拉模型

Author Community：

[ 1 ] 西安交通大学医学部

Reprint Author's Address：

Show more details

Translated Title

Translated Abstract

Background：
Traumatic　brain　injury　(TBI),　as　a　high　prevalence　and　potentially　devastating　disease,　is　the　leading　cause　of　death　for　persons　under　age　45　and　a　critical　public　health　and　socio-economic　problem　throughout　the　world.　Due　to　the　unique　biomechanical　nature　of　TBI,　varying　degrees　of　diffuse　axonal　injury　(DAI)　is　ubiquitously　accompanied　with　TBI,　and　be　thought　as　the　main　reason　which　results　to　long-term　coma　or　even　death　of　TBI　patients.　Yet　with　enormous　burden　of　DAI　to　the　society,　so　far　there　is　no　clinically　proven　therapeutic　drag　available　to　limit　the　neuropathological　sequelae.　So,　more　comprehensive　understanding　of　neurobiological　mechanisms　of　DAI　is　quite　urgent.

Even　though　many　progresses　about　the　pathogenesis　of　DAI　have　being　achieved　in　recent　decades,　the　more　detailed　mechanisms　of　DAI　caused　axonal　degeneration　and　disconnection　remain　elusive.　During　the　brain　trauma,　the　shearing　force　formed　during　cerebral　accelerated　or　decelerated　movement　is　the　mechanical　inducement　of　DAI.　And　after　that,　the　elevated　axoplasmic　Ca2+　([Ca2+]axo)　has　widely　been　reported　as　a　key　mediator　which　lead　to　secondary　axonal　degeneration　and　disconnection　through　several　mechanisms　including　activation　of　calpain　and　mitochondrial　failure.　At　present,　the　mechanism　about　how　Ca2+　accumulates　in　axoplasm　after　DAI　is　not　fully　understood.

Researches　have　already　proved　that　axonal　stretch　can　trigger　a　rapid　sharp　[Ca2+]axo　increase　(“initial　[Ca2+]axo　increase”),　which　makes　calpain　activated.　Further,　calpain　mediated　proteolysis　of　voltage　gated　sodium　channels　(NaChs)　can　activate　voltage-gated　calcium　channels　(VGCCs)　and　reverse　Na+-Ca2+　exchanger,　whereby　lead　to　sustained　[Ca2+]axo　increase,　calpain　activation　and　axonal　cytoskeleton　breakdown.　To　date,　the　mechanism　by　which　mechanical　stretch　triggers　the　“initial　[Ca2+]axo　increase”　is　not　clear.　One　possibility　is　mediated　by　the　stretch　activated　channels　(SACs),　which　can　be　directly　activated　by　strain　force　under　cell　membrane.　Besides,　it　has　been　reported　that　Ca2+　release　from　endoplasmic　reticulum　(ER)　involves　in　the　[Ca2+]axo　increase　caused　by　axonal　stretch　injury.　However,　it　is　still　unclear　whether　ER　calcium　release　directly　affects　axonal　degeneration　in　axonal　stretch　injury.　And　if　ER　Ca2+　depletion　occurring,　it　will　activate　store-operated　calcium　channels　(SOCCs),　as　a　subsequent　pathway　mediating　extracellular　Ca2+　influx.　Whether　SOCCs　also　participates　in　stretch-induced　[Ca2+]axo　increase　and　degeneration　is　unknown.　　　　　　　　

In　this　study,　a　new　established　in　vitro　DAI　model　and　mouse　cortical　neuron　cultures　were　used　to　comprehensively　discussed　several　potential　mechanisms　which　may　participate　in　[Ca2+]axo　increase　and　axon　acute　degeneration(occur　in　30min　post　injury)　after　DAI.　Also,　we　explored　the　protein　expressions　of　SACs　and　SOCCs　on　the　axons　of　mouse　cortical　neurons.　As　for　both　SACs　and　SOCCs,　their　channel　candidates　are　still　controversial.　Relatively　widely　accepted　molecular　components　for　SACs　are　TRPC1,　TRPC6,　TRPV1　and　TRPV2.　And　STIM1,　Orai1,　and　TRPC1　are　largely　being　considered　as　SOCCS　components.　　　

Objectives：
1.　To　establish　a　brand　new　DAI　in　vitro　model,　and　evaluate　this　new　model　comprehensively.

2.　To　determine　the　dynamic　pattern　of　[Ca2+]axo　incrase　after　DAI　

3.　To　determine　whether　endoplasmic　reticulum　Ca2+　release　occurs　after　DAI.

4.　To　determine　whether　components　of　store-operated　channels　and　stretch-activated　channels　express　in　axons　structurally　and　functionally.

5.　To　investigate　roles　of　store-operated　channels　and　stretch-activated　channels　in　the　[Ca2+]axo　increase　and　axonal　secondary　injury　processes.

6.　To　investigate　the　interactional　roles　of　stretch-activated　channels,　voltage-gated　sodium　channels　and　voltage-gated　calcium　channels　in　the　[Ca2+]axo　increase　after　DAI.　

Methods：
1.　Establishment　and　evaluation　of　DAI　in　vitro　model:　Modified　primary　neuron　cultured　metheod　was　used　to　conduct　compartmental　culture　of　axons　and　somata.　DAI　processes　were　simulated　by　axonal　mechanical　stretch.　MAP2,　Tau　and　β-tubulin　immunofluorescences　were　used　for　examation　of　the　purity　of　cultured　neurons.　Immunofluorescences　of　Tau　and　β-tubulin　were　used　for　identification　of　the　axon-only　region.　Theoretical　and　real　stretch　extents　were　obtained　by　finite　element　analysis　and　length　measurement.　Axonal　cytoskeleton　proteins,　such　as　Tau　and　Tau　and　β-tubulin　were　investigated　by　fluorescent　immunocytochemistry.　Theoretical　and　real　stretch　extents　were　obtained　by　finite　element　analysis　and　length　measurement.　Axonal　pathological　changes　caused　by　stretch　injury　were　observed　by　confocal　microscope.　Propidium　iodide　(PI)　staining　was　used　to　determine　the　neuronal　cell　death　after　injury.　　　　

2.　Fluo-4　AM　and　Cell　tracker　red　were　used　for　Ca2+　imaging,　by　which　dynamic　[Ca2+]　axo　changing　pattern　was　investigated.　Ca2+　free　extracellular　fluid　and　caffeine　were　used　for　study　of　the　endoplasmic　reticulum　Ca2+　release.

3.　Immunofluorescence,　Western　blot　methods　were　used　to　study　expressions　of　STIM1,　Orai1,　TRPC1,　TRPC6,　TRPV1　and　TRPV2　in　axons.　

4.　CPA　(a　sacro/endoplasmic　Ca2+-ATP　inhibitor　can　make　ER　Ca2+　release)　and　inhibitor　of　SOCs　(SKF-96365,　Pyr-6　and　Gd3+)　were　used　to　prove　SOCs　exist　in　axons　functionally.

5.　Roles　of　SOCs　and　SACs　in　[Ca2+]axo　increase　and　ASI　after　DAI　were　tested　by　either　SKF-96365,　Pyr-6　or　GsMTx-4　and　Gd3+　

6.　Roles　of　NaChs　and　VGCCs　in　[Ca2+]axo　increase　after　DAI　were　tested　TTX　and　nifedipine.

7.　High　potassium　extracellular　fluid　was　used　to　study　activity　of　VGCCs　on　axons　of　sham　group,　injury　group　and　GsMTx-4　treatment　group.　　

Results:
1.　Neuons　of　purity　more　than　90%　can　be　obtained　by　this　modified　primary　neuron　culture　method.　Neurites　in　the　axon-only　regions　exhibit　positive　staining　of　Tau,　whereas　negative　staining　of　MAP2.　The　maximum　stain　occurs　in　the　central　part　of　chamber　for　both　Twenty　percent　stretch　and　fifty　percent　stretch.　And　the　real　stain　of　axons　under　20%　stretch　was　14%,　whereas　the　value　increase　to　42%　under　50%　stretch.　The　extent　of　axonal　beading　caused　by　50%　stretch　(n=42)　was　significantly　higher　than　20%　stretch　(n=28,　P＜0.01).　Fifty　percent　stretch　caused　neuronal　cell　death　determine　by　PI　staining.　PI　positive　staining　cells　at　1d　post　50%　stretch　(n=9)　was　significantly　higher　than　sham　group　(n=6)　and　20%　stretch　group　(n=7),　whereas　PI　positive　staining　cells　at　1d　post　20%　stretch　was　not　significantly　higher　than　the　sham　group　(P＞0.05).　Besides,　fifty　percent　stretch　resulted　in　the　interruption　of　cytoskeletion　proteins,　such　as　Tau　(n=6)　and　β-tubulin　(n=6).　Inside　the　beads　areas,　there　were　significant　higher　Tau　fluorescent　intensities　than　outside　beads　areas　(P＜0.01).　However,　Inside　the　beads　areas,　there　were　significant　lowerβ-tubulin　fluorescent　intensities　than　outside　beads　areas　(P＜0.01).　　　　　　　　　

2.　[Ca2+]　axo　increasd　after　50%　stretch.　For　the　non-bead　areas　of　axons　(n=42),　[Ca2+]　axo　peaked　at　30s　after　injury　(P＜0.01,　vs　sham　group,　n=19),　than　[Ca2+]　axo　decreased　gradually.　At　30min　after　injury,　[Ca2+]　axo　of　non-bead　areas　was　still　higher　than　sham　group　(P＜0.05).　As　to　bead　areas,　[Ca2+]　axo　also　increased　strongly　at　30s　post　injury　(vs　sham　group,　P＜0.01).　In　the　following　10-30　minutes,　[Ca2+]　axo　inside　bead-areas　increased　continuously　(vs　sham　group,　P＜0.01;　vs　non-bead　areas,　P＜0.01)　　　

3.　Fifty　percent　stretch　did　not　caused　[Ca2+]axo　increase　in　the　Ca2+-free　extracellular　fluid　condition　(n=6)　(P＞0.05,　vs　sham,　n=19).　30min　post　injury,　number　of　beads　per　100　microns　(n=6)　was　not　significantly　higher　than　sham　group　(n=19)　(P＞0.05).　Caffeine　triggered　[Ca2+]　axo　was　significant　lower　in　50%　stretch　group　(n=6),　compared　with　sham　group　(n=6)　(P＜0.01).

4.　STIM1,　Orai1　and　TRPC1　all　expressed　in　axons.　CPA　trigged　Ca2+　influx　was　elicited　in　axons.　And　this　CPA　trigged　Ca2+　influx　was　significantly　suppressed　by　SOCs　inhibitors　(SKF-96365,　n=6,　Pyr-6,　n=6,　Gd3+,　n=6)　(all　P＜0.01,　vs　blank　control　group,　n=4).

5.　SKF-96365　(n=9)　and　Pyr-6　(n=7)　significantly　decreasd　the　[Ca2+]axo　increase　inside　bead　area　at　5,　10　and　30min　post　injury.(vs　injury　group,　n=42,　all　P＜0.01).　Neither　SKF-96365　nor　Pyr-6　decreased　the　[Ca2+]　axo　increase　outside　bead　area　at　any　time　point　less　than　30min　post　injury　(vs　injury　group,　all　P＞0.05　).　At　30min　post　injury,　overlapped　coefficient　and　Pearson’s　correlation　r　of　STIM1-Orai1　and　STIM1-TRPC1　were　increased　significantly　(injury　group,　n=6,　vs　sham　group,　n=6,　P＜0.05)　

6.　For　mouse,　TRPC6　and　TRPV2,　but　not　TRPV1　expressed　in　axons.　SACs　inhibitors,　GsMTx-4　(n=8)　and　Gd3+(n=7),　significantly　restrained　[Ca2+]axo　increase　at　each　time　points　from　30s-30min　post　injury(vs　injury　group,　n=42,　all　P＜0.01).

7.　Both　TTX　(n=6)　and　nifedipine　(n=7)　significantly　restrained　[Ca2+]axo　increase　at　each　time　points　from　30s-30min　post　injury(vs　injury　group,　n=42,　all　P＜0.01).

8.　At　30s　post　injury,　High　K+　triggered　[Ca2+]　axo　increase　of　injury　group　(n=7)　was　significantly　lower　than　sham　group　(n=13).　High　K+　triggered　[Ca2+]　axo　increase　of　injury　+　GsMTx-4　group　(n=5)　was　significantly　higher　than　injury　group　(P＜0.05).　There　was　no　significant　difference　between　injury　+　GsMTx-4　group　and　sham　group　(P＞0.05).

Conclusions:
1.　A　brand　new　DAI　in　vitro　model　was　established　by　mechanical　stretch　method.　Fifty　percent　stretch　is　capable　to　be　the　ideal　option　for　creating　this　model,　due　to　it　of　more　potent　secondary　axonal　degeneration　and　disconnection　than　20%　stretch.　At　the　same　time,　model　created　by　fifty　percent　stretch　conforms　to　clinical　pathological　characters　of　DAI.　

2.　DAI　results　in　uneven　[Ca2+]　axo　increase,　which　manifest　as　higher　as　well　as　more　sustained　in　bead　areas,　compared　with　non-bead　areas.　　

3.　DAI　results　axonal　ER　Ca2+　release.

4.　SOCs　exist　in　axons　of　mouse　cortical　neurons　structurally　and　functionally.　SOCs　play　a　role　in　the　[Ca2+]　axo　increase　inside　beads.　However,　SOCs　inhibitors　have　no　protective　effect　for　axonal　secondary　injury.

5.　SACs　components　components,　such　as　TRPC,　TRPC6　and　TRPV2,　also　exist　in　axons　of　mouse　cortical　neurons　structurally.　SOCs　participate　in　the　[Ca2+]　axo　increase　and　axonal　secondary　injury　after　DAI.　

6.　Activations　of　NaChs　and　VGCCs　are　also　necessary　for　[Ca2+]　axo　increase　after　DAI.　SACs　may　be　the　initial　procedure　leading　to　[Ca2+]　axo　increase.

Translated Keyword

[]

Research Interests

Classification

Corresponding authors email

弥漫性轴索损伤后内质网钙释放对轴突内早期钙离子浓度的影响
2014，西安交通大学学报（医学版）
弥漫性轴索损伤与突触体素的相关性研究
2005，
脑弥漫性轴索损伤
2006，医学综述
脑弥漫性轴索损伤的发生机制
2007，中华神经医学杂志

Basic Info ：

Degree：临床医学博士

Mentor：宋锦宁

Student No.：

Year： 2015

Language： Chinese

Cited Count：

WoS CC Cited Count： 0

30 Days PV： 6

Affiliated Colleges：

医学部本学院/部未明确归属的数据

Location

Library Discovery Baidu Scholar Search

Type
Departments

All Years Choose Year From to