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目的:探讨不同疾病状态下SLE患者外周血髓样树突状细胞（mDC）和浆样树突状细胞（pDC）的频率及肾脏损伤的关系。方法:应用流式细胞术检测102例SLE患者和10名健康对照组外周mDC和pDC的频率，分析与疾病活动度及肾脏损伤的关系。定量资料采用中位数（第25百分位数，第75百分位数）[ M（ P25， P75）]表示，非正态分布的2组计量资料采用Mann-Whitney U检验，2组计量资料的相关性采用Spearman秩相关分析，相关因素分析采用多元线性回归进行统计分析。 结果:102例SLE患者外周血pDC[14.00%（7.92%，19.65%）和24.55%（19.68%，32.90%）， Z=-3.163， P<0.01]和mDC[21.25%（13.28%，32.83%）和34.85%（24.58%，41.93%）， Z=-2.607， P<0.01]频率显著低于健康对照组，12例初发SLE患者pDC[9.09%（7.31%，17.38%）和24.55%（19.68%，32.90%）， Z=-3.033， P<0.01]和mDC[9.40%（7.88%，21.60%）和34.85%（24.58%，41.93%）， Z=-3.231， P<0.01]频率也显著低于健康对照组。校正混杂因素后，多因素分析示SLEDAI水平是影响pDC（ P=0.019）和mDC（ P<0.01）频率的主要因素。活动期LN患者pDC频率[8.02%（1.00%，10.40%）和14.60%（1.73%，38.0%）， P=0.045]及mDC[8.80%（5.20%，13.20%）和13.90%（5.27%，40.20%）， P=0.038]频率均显著低于非LN活动期患者。此外，活动期LN患者pDC[8.02%（2.25%，9.97%）和16.70%（11.80%，24.60%）， Z=-2.490， P=0.015]和mDC[8.80%（5.99%，12.80%）和20.20%（11.20%，42.80%）， Z=-2.226， P=0.029]频率也均显著低于稳定期LN患者。mDC频率与补体C3（ r=0.455， P<0.01）和C4（ r=0.289， P<0.01）水平呈正相关。 结论:SLE患者mDC和pDC频率存在明显异常，并与疾病活动密切相关。另外，pDC和mDC可能参与LN的发生发展。

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红斑狼疮，系统性 狼疮肾炎 树突细胞

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目的探讨不同疾病状态下SLE患者外周血髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC)的频率及肾脏损伤的关系。方法应用流式细胞术检测102例SLE患者和10名健康对照组外周mDC和pDC的频率,分析与疾病活动度及肾脏损伤的关系。定量资料采用中位数(第25百分位数,第75百分位数)[M(P25,P75)]表示,非正态分布的2组计量资料采用Mann-WhitneyU检验,2组计量资料的相关性采用Spearman秩相关分析,相关因素分析采用多元线性回归进行统计分析。结果 102例SLE患者外周血pDC[14.00%(7.92%,19.65%)和24.55%(19.68%,32.90%),Z=-3....

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红斑狼疮 狼疮肾炎 树突细胞 系统性

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目的:研究狼疮性肾炎(LN)患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)的表达及其临床意义。方法:选取97例从2016年1月至2019年12月在汉中三二〇一医院接受诊治的LN患者作为研究对象。其中活动期组38例与非活动期组59例，选取51例健康体检者作为对照组，对比各组血清NGAL、MCP-1、TWEAK的水平与肾功能指标的水平，通过受试者工作特征(ROC)曲线评价血清NGAL、MCP-1、TWEAK表达对LN疾病活动性的诊断价值。结果:活动期组和非活动期组患者的血清NGAL、MCP-1、TWEAK、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白、dsDNA水平高于对照组，且活动期组以上各指标均高于非活动期组( P<0.05)。Pearson相关分析提示，LN患者血清NGAL、MCP-1、TWEAK水平与系统性红斑狼疮疾病活动度评分(SLEDAI)、Scr、BUN、24 h尿蛋白和dsDNA水平呈正相关( P<0.05)。ROC曲线分析可得：联合血清NGAL、MCP-1、TWEAK预测LN患者疾病活动性的曲线下面积(AUC)为0.865，特异度、灵敏度、AUC、约登指数均高于单一指标。 结论:LN患者活动期时血清NGAL、MCP-1、TWEAK表达水平升高，且与疾病的活动性密切相关，对于预测LN的活动性具有较高的应用价值，可作为临床预测LN活动期的生物标志物。

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单核细胞趋化蛋白1 狼疮肾炎 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂

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目的研究探讨霉酚酸酯(MMF)对狼疮性肾炎(LN)的临床治疗效果。方法收集2008年1月至2017年12月于本院治疗的40例LN患者,应用数字随机表法将其随机分为两组,每组20例。对照组采用环磷酰胺治疗,观察组采用霉酚酸酯治疗,比较两组的临床疗效、不良反应、治疗前后的疾病活动度指数、肾功能指标及肾脏病理指标。结果两组的总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组的总有效率高于对照组(P0.05),治疗后,与对照组比,观察组的疾病活动度指数、BUN、Scr、24 h尿蛋白和总不良反应发生率均明显降低(P0.05)。结论霉酚酸酯治疗狼疮性肾炎可以达到与环磷酰胺相当的临床疗效,霉酚酸酯相比于环磷酰胺可以减少患者不良反应,其安全性更加安全可靠。

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狼疮肾炎 霉酚酸

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目的： 系统性红斑狼疮（system lupus erythematosus,SLE）是一种系统性的，复杂的具有广泛临床异质性的自身免疫性疾病，其重要特征是患者体内存在大量的致病性自身抗体，形成免疫复合物，最终导致器官损伤。B细胞是机体唯一可分化为抗体分泌细胞---浆细胞的细胞，传统认为，B细胞主要通过产生抗体，并递呈抗原在SLE的发生发展中起着关键性作用，但近年发现B细胞也是由功能不同的亚群组成的异质群，可以分泌多种促炎细胞因子，包括IL-6、IL-2及TNF-α等，也可以分泌抑炎因子，如IL-10、IL-35及TGF-β调节免疫反应，抑制致病性T细胞及其他淋巴细胞的增殖，从而抑制SLE中的过度炎症反应，目前把这一特殊的B细胞亚群称为调节性B细胞。有关这一领域的研究还刚刚起步，探索B细胞亚群在SLE患者体内的分布情况，有助于进一步在细胞水平阐述SLE的发病机制，为SLE的诊断和治疗提供新证据。 尽管近年来对SLE的病因及发病机制的有了更多了解，但目前SLE的治疗核心仍是30年前建立的激素联合非特异性广泛免疫抑制剂的治疗方法，这种治疗是双刃剑，常常造成两种状态，一是临床治疗不足，使SLE处于低活动状态，易复发，造成累加器官损害，影响预后，二是过度治疗，广泛免疫抑制近期造成感染增加，远期增加肿瘤发生。如何准确高效的监测机体免疫活化状态，探索无创、简单、可重复的生物标志一直是临床研究的热点。探索B细胞亚群在SLE体内的分布及其功能改变，是从细胞和分子水平评价SLE患者免疫活化状态的一个方面。本研究初步检测了SLE中各B细胞亚群及其功能的变化，探讨B细胞亚群的改变在SLE的免疫发病和疾病监测中的作用。 方法: 1）纳入150例SLE患者及30例健康对照，其中包括初发SLE患者20例，病程<3个月，未接受任何治疗；治疗后SLE患者130例，接受传统药物治疗时间>6个月，其中接受激素及羟氯喹联合治疗的患者38例，激素剂量<10毫克；接受激素联合羟氯喹和环磷酰胺治疗的患者14例，接受激素联合羟氯喹和甲氨蝶呤治疗的患者15例，接受激素联合羟氯喹及吗替麦考酚酯治疗的患者31例。 2）采用流式细胞术检测B细胞各亚群在SLE患者外周血中的变化情况，利用表面标记CD19，CD27，lgD，CD24将B细胞分为5种B细胞亚群，包括转换后记忆B细胞（CD19+CD27+lgD-），转换前记忆B细胞（CD19+CD27+lgD+），幼稚B细胞（CD19+CD27- lgD+），双阴B细胞（CD19+CD27-lgD-）和调节性B 细胞（CD19+CD24+CD27+）； 3）分析SLE患者外周血中B细胞各亚群的比例和免疫学指标以及治疗之间的关系； 4）应用SPSS 23.0软件对各项结果进行分析，两组间比较用独立样本t检验，用Spearman秩相关性分析做各指标的相关性研究。 结果： 1）初发SLE患者外周血中转换后记忆B细胞、转换前记忆B细胞的比率明显低于健康对照，而幼稚B细胞的比例高于健康对照（P<0.05）。 2）SLE患者外周血中调节性B细胞比例低于健康对照，且SLEDAI评分呈负相关（r=-0.6，P<0.05）。 3）治疗后SLE患者外周血中总B细胞的比例低于初发未治疗SLE患者，而转换后记忆B细胞的比例显著高于初发未治疗SLE患者（P<0.05）。 4）合并有狼疮肾炎（LN）的患者中转换后记忆B细胞和双阴B细胞在的比例明显高于不合并狼疮肾炎的患者（P<0.05）。 结论： 本研究发现， 初发SLE患者外周中存在B细胞亚群分布异常，其中包括转换后记忆B细胞、转换前记忆B细胞的降低，及幼稚B细胞的比例升高。此外，初发SLE患者外周血中调节性B细胞的比例低于健康对照，且和SLE疾病活动度呈负相关，说明B细胞亚群的分布异常可能参与了SLE的发病。 传统改善病情抗风湿药对SLE患者外周血中B细胞亚群分布有一定的影响，不同的治疗方案包括：激素联合羟氯喹、激素联合羟氯喹及吗替麦考酚酯、激素联合羟氯喹及环磷酰胺几种治疗均能降低总B细胞数量，但这几种治疗方案对转换后记忆B细胞影响均有限。 合并有LN的SLE患者外周血中转换后记忆B细胞和双阴B细胞间的比例高于不合并LN的SLE患者。提示转换后记忆B细胞在LN发病中可能起着非常重要的作用。这些发现为B细胞在SLE的发病机制中的作用提供了新的证据。

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调节性B细胞 狼疮肾炎 系统性红斑狼疮 转换后记忆B细胞 转换前记忆B细胞

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背景： 皮肤型红斑狼疮（cutaneous lupus erythematosus，CLE）是一种慢性的、皮肤的自身免疫性疾病，皮损的主要特征为光敏性，可引起皮肤色素沉着、瘢痕和脱发等。CLE可发生于全身任何部位，但以日光暴露部位为主。紫外线，尤其是中波紫外线（UVB），可诱发皮肤的损伤，继而激活免疫系统，上调光敏相关蛋白Ro52的表达，诱导Ro52-抗Ro52免疫复合物的形成，最终促使皮肤光敏的发生。但其诱发Ro52上调的机制至今仍不甚明确。 肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis, TWEAK）为肿瘤坏死因子超家族中的一员，TWEAK通过与其唯一受体成纤维细胞生长因子诱导14（fibroblast growth factor-inducible 14，Fn14）结合参与多种生物学作用，包括诱导细胞凋亡、促进细胞增殖、促进血管形成、促进肿瘤细胞的侵袭和转移以及诱导炎症因子表达等。最近，有研究发现TWEAK/Fn14在狼疮小鼠MRL/lpr的狼疮脑病、狼疮肾炎以及皮肤红斑狼疮的发病中发挥作用，且Fn14受体敲除可以缓解这些病情的发生。另外，UVB照射的角质形成细胞中Fn14受体明显上调。根据以上研究，我们推测TWEAK可能参与了皮肤红斑狼疮光敏的发病。 目的： 本研究拟通过探究TWEAK、Fn14在组织水平的表达推测其与CLE发病的关系，并且通过体外TWEAK干预角质形成细胞观察Ro52表达变化，进一步探究TWEAK在CLE光敏发生的机制，从而为CLE光敏的病因和治疗提供科学依据。 方法： 1. TWEAK/Fn14在CLE中的表达： LE患者皮损收集：①分别收集DLE、SCLE和SLE三型红斑狼疮患者皮损各5例，并选用美容手术切除的正常组织10例作为对照。免疫组化检测各皮损中TWEAK、Fn14和Ro52表达情况；②ImageJ分析TWEAK、Fn14及Ro52表达阳性百分比；③qRT-PCR检测组织中TWEAK、Fn14及炎性因子RANTES（调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子）、MCP-1（单核细胞趋化蛋白-1）、IP-10（干扰素诱导蛋白-10）的mRNA表达水平。 2. TWEAK对角质形成细胞Ro52表达的影响： 鼠角质形成细胞PAM212，用100 ng/ml（预实验所得）的TWEAK联合5.5mJ/cm2 UVB（预实验所得）干预24h后，观察细胞中Ro52及炎性因子的表达变化。① qRT-PCR检测细胞中Ro52及炎性因子mRNA表达水平；②Western-blot检测细胞裂解液及上清中Ro52蛋白表达水平；③免疫荧光检测Ro52的荧光变化。Fn14 siRNA转染24h后再予以TWEAK刺激24h后，再次重复上述实验步骤，即① qRT-PCR检测细胞中Ro52及炎性因子mRNA表达水平；②Western-blot检测细胞裂解液及上清中Ro52蛋白表达水平；③免疫荧光检测Ro52的荧光变化。 3. TWEAK调控角质形成细胞Ro52表达的下游信号分子： 鼠角质形成细胞PAM212，预先用JSH-23（20 µM），U0126 （10 µM）和wortmannin （25µg/ml）分别处理2h后，再以100 ng/ml的TWEAK干预24h，观察细胞中Ro52及相关因子表达变化：①qRT-PCR检测细胞中Ro52及炎性因子的mRNA表达水平；②Western-blot检测细胞裂解液及上清中Ro52蛋白表达水平；③ Western-blot检测NF-κB（p50和p65）、ERK（p-ERK和ERK）和PI3K/Akt（p-Akt和Akt）相关分子表达。 4. TWEAK刺激对角质形成细胞趋化巨噬细胞能力的调节： 鼠角质形成细胞PAM212接种于6孔板，以100ng/ ml浓度TWEAK干预24h后，孔内转入有小鼠巨噬细胞（J774.2）的小室，37°C培养2h后①结晶紫染色计数膜底部的阳性细胞；②qRT-PCR检测细胞中CCL17和CCL22相对表达量；③ELISA检测细胞培养上清中CCL17和CCL22表达水平；④ELISA检测J774.2上清中IFN-α的水平；⑤ qRT-PCR检测J774.2上清刺激的PAM212细胞内Ro52的mRNA表达水平；⑥ Western-blot检测PAM212细胞上清及裂解液中Ro52蛋白表达水平。 5. TRAF2和TNFR在CLE发生中的作用： 鼠角质形成细胞PAM212接种于6孔板，以5.5mJ/cm2 UVB干预后，①免疫荧光检测细胞表面TNFR1和TNFR2的表达强度；②Western-blot检测细胞裂解液中TNFR1和TNFR2蛋白表达水平；③qRT-PCR检测细胞中TRAF2，cIAP1和NIK的mRNA表达水平；④Western-blot检测细胞裂解液中TRAF2和cIAP1蛋白表达水平。 结果： 1. TWEAK/Fn14在CLE中表达升高： LE患者皮损中TWEAK（62.33±2.92%/mm2）和Fn14（75.28±4.47%/mm2）表达较健康皮肤（TWEAK：6.32±2.50%/mm2；Fn14：3.38±0.46%/mm2）或LE患者的健康组织（TWEAK：7.65±0.90%/mm2；Fn14：3.14± 0.45%/mm2）明显升高，差异有统计学意义（P<0.01）；与健康对照组组织相比，qRT-PCR结果显示CLE组织中TWEAK （1.47±0.20×10-3vs. 3.50± 0.49×10-3）、Fn14（2.01± 0.19×10-2 vs. 1.03±0.13×10-2）及其下游炎性因子RANTES（5.44 ± 1.47×10-2 vs. 0.96 ± 0.15×10-2）、MCP-1（18.54± 3.54×10-2 vs. 5.13± 0.96×10-2） 和IP-10（1.74± 0.30 vs. 4.26± 0.05×10-2）的mRNA表达明显升高，组间差异有统计学意义（P<0.05）。 2. TWEAK上调角质形成细胞中Ro52的表达： 与未干预的鼠角质形成细胞PAM212相比，100 ng/ml TWEAK联合5.5mJ/cm2 UVB干预24h后，PAM212细胞中Ro52 mRNA（3.86±0. 58×10-3 vs. 1.13±0.96×10-3）及蛋白表达水平（1.06±0.09 vs. 0.41±0.01）明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；TWEAK/Fn14活化的下游炎性因子RANTES（146.607±1.0676 vs. 1.447±0.151×10-3）、MCP-1（1.96±0.3404×10-4 vs. 0.1945±0.01×10-4）和IP-10（0.87±0.20×10-4 vs. 0.13±0.06×10-4 的mRNA水平亦升高，Fn14 siRNA转染后Ro52 mRNA （1.55±0.10×10-3 vs. 2.17±0.21×10-3）及上清（130.50±5.44 vs. 191.50±2.44）和裂解液中蛋白（0.78±0.02 vs.1.00±0.02）表达水平明显降低；免疫荧光显示100ng/ ml TWEAK联合5.5mJ/cm2 UVB干预24h后Ro52荧光明显增强，Fn14 siRNA转染后荧光强度明显减弱。 3. TWEAK通过活化NF-κB和PI3K影响角质形成细胞Ro52表达： 与对照组（2.19±0.16）相比， JSH-23（5.20±0.6×10-3）和wortmannin（1.66±0.07）预先处理过的PAM212细胞中Ro52 mRNA表达明显受抑制（P<0.05），而U0126 （3.24±0.34）促进了Ro52的表达。相应地，Western-blot检测显示PAM212培养上清（0.97±0.01，0.86±0.001，1.02±0.01和 0.73±0.005）和细胞裂解液（0.84±0.01，0.76±0.001，0.93±0.006 和0.76±0.001）中Ro52变化趋势相似。另外，JSH-23可抑制RANTES（14.66±1.01×10-3 vs. 2.73±0.59×10-3）和MCP-1（2.03±0.41×10-3 vs. 5.67±0.36×10-3）的表达，U0126和 wortmannin 对这两个因子的调控不同；而这些抑制剂对IP-10的调控不甚显著（0.87±0.20×10-4，1.31±0.14×10-4 vs. 0.68±0.16×10-4，0.50±0.42×10-4），但整体趋势一致。这些抑制剂作用后明显下调p52和p60、p-ERK和ERK、 p-Akt和Akt的表达，且JSH-23同时下调了p-Akt和Akt的表达，而wortmannin同时下调了p50和p65的表达。 4. TWEAK促使角质形成细胞趋化巨噬细胞参与CLE发生： 用100ng/ ml TWEAK干预后的PAM212趋化J774.2的作用明显增强，趋化的巨噬细胞数由13±3上升至32±4；细胞中CCL17（87±6×10-4 vs. 2±3×10-4）和CCL22 mRNA （69±4×10-4 vs. 16±4×10-4）水平明显增高，ELISA结果显示细胞培养上清中CCL17（68±11 vs. 16±4）和CCL22（75±8 vs.32±6）蛋白水平均明显升高，组间差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测显示J774.2上清中IFN-α（7.18±0.76）的水平较PAM212细胞（0.77±0.29）水平高，且J774.2上清刺激的PAM212细胞进一步促进了IFN-α（103.10±4.45）的上调。qRT-PCR结果显示J774.2上清刺激的PAM212细胞内Ro52的mRNA（1.54±0.11×10-4）水平较PAM212组（0.69±0.21×10-4）升高； Western-blot检测亦显示PAM212细胞上清及裂解液中Ro52蛋白表达水平。 5. TRAF2和TNFR相互作用在CLE发生中的关键作用： 流式细胞仪检测结果显示5.5mJ/cm2 UVB干预后的PAM212细胞表面TNFR1（23.69±0.86% vs. 6.38±0.78%）表达明显升高，而TNFR2（25.16±0.95% vs. 26.72±0.93%）表达无明显变化；免疫荧光和Western-blot检测结果与流式细胞术结果基本一致。qRT-PCR结果显示TWEAK处理后PAM212细胞中TRAF2 （0.89±0.11×10-2 vs. 0.48±0.06×10-2）和cIAP1（0.88±0.10×10-4 vs. 0.09±0.02×10-4）的mRNA水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），NIK的mRNA表达无明显差异。细胞裂解液中TRAF2和cIAP1蛋白随着TWEAK刺激呈时间依赖的降低。另外，TRAF2 siRNA转染后Ro52表达降低。 结论： 1. TWEAK、Fn14在CLE皮损中高表达，而外源性TWEAK促进了角质形成细胞中Ro52上调、转位和释放，介导CLE的光敏反应； 2. TWEAK/Fn14参与CLE光敏性与其活化NF-κB和PI3K信号通路有关； 3. TWEAK/Fn14活化后趋化巨噬细胞，间接参与CLE的光敏性； 4. TRAF2和TNFR相互作用在CLE光敏中亦发挥主要作用。 关 键 词：TWEAK-Fn14；皮肤红斑狼疮；光敏反应 论文类型：应用基础

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TWEAK-Fn14 光敏反应 皮肤红斑狼疮

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背景： 狼疮性肾炎（Lupus nephritis，LN）是系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）最常见且严重的并发症，预后较差。目前通常用糖皮质激素联合免疫抑制剂等传统方案治疗LN，但对部分患者，尤其是重症患者疗效不佳。而且，应用大量糖皮质激素与免疫抑制剂通常出现严重副作用，停药后病情反复，是LN患者重要的致死原因。已有应用间充质干细胞（Mesenchymal stem cell，MSC）成功治疗SLE的实验室研究及临床案例报道。但是，移植后MSC仅有极少量到达局部组织，且凋亡明显。促进移植后MSC存活、增殖，提高MSC移植疗效是亟待解决的问题。研究发现应用某些生长因子、细胞因子、高密度脂蛋白、低氧、LPS或化学合成物质等来提高MSC功能和疗效。但是，尚未有应用LPS处理MSC治疗LN相关文献报道。 目的： 细胞实验研究LPS对MSC增殖、凋亡的影响，探究其可能机制，动物实验验证 LPS-MSC对pristane诱导LN模型疗效及可能机制，为临床上LN治疗提供新思路。 方法： 1. 提取骨髓间充质干细胞进行体外培养并鉴定。 2. 不同浓度LPS处理MSC，用MTT实验测定MSC体外增殖情况，同时明确最适刺激细胞增殖的LPS浓度。 3. PCR实验检测LPS-MSC组及MSC组bax、bcl-2、VEGF基因水平，明确LPS对MSC凋亡、增殖及细胞因子合成的影响。 4. 6-8周龄雌性BALB/c小鼠60只，SPF级，随机分2组：（1）模型组50只，一次性腹腔注射pristane 0.5ml；（2）对照组10只，一次性腹腔注射等体积生理盐水，自注射之日起，每天观察进食、活动等一般情况，每隔4周称体重，检测尿蛋白水平。12、16、20周检测抗双链DNA抗体（抗dsDNA抗体）水平，20周时各组随机选择3只小鼠，留取血、尿、肾组织标本，检测尿蛋白、抗dsDNA抗体水平及肾组织病理，评估造模成功与否。 5. 造模成功小鼠随机分3组：（1）MSC组：经鼠尾静脉注射1×106个/200ul MSC；（2）LPS-MSC组：经鼠尾静脉注射1×106个/200ul LPS预处理MSC；（3）空白对照组：经鼠尾静脉注射等体积生理盐水。每2周每组随机抽取3只小鼠留取血、尿、肾组织标本，检测尿蛋白、抗dsDNA抗体水平及肾组织病理，评估各组治疗效果。 6. 数据分析：应用SPSS18.0统计学软件，采用独立样本t检验、方差分析及非参数检验进行统计学分析。数据以均数±标准差表示，P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果： 1. MSC培养及鉴定：细胞接种24h后贴壁生长，体积逐渐增大，呈梭形，漩涡状排列，放射状生长。多次传代形态稳定，体外增殖速度不变。细胞表面标志CD29（+）、CD90（+）、CD45（–），能定向诱导细胞成骨、成脂分化，符合MSC特征。 2. 细胞增殖实验：LPS与MSC共培养对MSC增殖能力有不同程度提高，其中，1.0ug/ml LPS增殖能力较其它浓度组增高（P<0.05），差异具有统计学意义。 3. PCR实验：1.0ug/ml LPS处理MSC的bcl-2基因及VEGF基因表达高于正常对照组（P<0.01），bax基因表达水平无明显差异。Bcl-2/bax比例明显增高（P<0.01），差异有统计学意义。 4. 建立狼疮鼠模型：模型组20周时死亡2只，有2只出现大量腹水，其中1只为血性腹水，1只淡黄清亮。74%出现关节肿胀、畸形，8%出现局部脱毛。模型组尿蛋白水平、抗dsDNA抗体水平较对照组明显增高（P<0.01），差异有统计学意义。肾组织病理观察到模型组小鼠肾小球系膜细胞及系膜基质增生，囊壁增生，部分肾小球硬化，对照组肾组织无类似变化。 5. 疗效评估：干预后LPS-MSC组尿蛋白、血清抗dsDNA抗体水平和肾组织病理改变较其他2组减轻（P<0.05），差异有统计学意义。MSC组尿蛋白水平、抗dsDNA抗体水平和肾组织病理改变较空白对照组降低（P>0.05），差异无统计学意义。 结论： 1. Pristane 0.5ml一次性腹腔注射能诱导雌性BALB/c小鼠，成功建立狼疮性肾炎模型。 2. LPS可能通过抑制MSC凋亡、促进MSC增殖及VEGF合成分泌，增强MSC疗效。 3. LPS处理MSC能增强MSC对狼疮肾炎的疗效。

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AKT LN LPS MSC VEGF

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狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(SLE)最常见和严重的临床表现,也是最常见的继发性肾小球肾炎,约占肾小球疾病的12%,占继发性肾小球疾病的70%左右.LN一个重要病理特点即是肾间质大量的单核/巨噬细胞、淋巴细胞的浸润以及由此而加剧的肾小管间质病变.

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Abstract ：

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种病因未明、自身免疫介导的炎症性结缔组织病，可损害全身多个系统、器官和组织。约60%-70%的SLE患者出现肾损害的临床表现，而结合肾脏免疫病理检查，则几乎100%SLE患者存在不同程度的肾脏损害，此称为狼疮肾炎（lupus nephritis，LN）。LN是SLE最常见和严重的临床表现，也是最常见的继发性肾小球肾炎，约占肾小球疾病的12%，占继发性肾小球疾病的70%左右。LN的发病机制中，细胞免疫机制目前被认为起相当重要的作用。近年来的研究发现，巨噬细胞和T淋巴细胞在肾组织的浸润是LN疾病发展的重要因素，并与肾损伤严重程度密切相关。虽然，目前对于肾组织中的巨噬细胞和T淋巴细胞浸润的机制并不完全清楚，但是肾组织局部化学趋化因子的表达增高，被认为是导致巨噬细胞和T淋巴细胞在炎症组织局部聚集的重要因素之一。趋化因子(chemokine)是一类结构和功能相关的多肽超家族，对中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞具有趋化和预活化作用，目前趋化因子分为CXC、CC、C和CX3C四个亚家族。干扰素诱导蛋白10(interferon inducible protein-10，IP-10)与干扰素诱导的单核因子(monokine induced by interferon-γ，Mig)属于不含ELR序列（谷氨酸-亮氨酸-精氨酸序列）的CXC类趋化因子，二者是与免疫活化和免疫效应密切相关的趋化因子，通过与其共同的受体CXCR3结合，主要对单核/巨噬细胞和T淋巴细胞起趋化作用。国内外许多研究显示血/尿IP-10水平、PBMCs IP-10 mRNA表达水平与LN肾活动程度相关，IP-10可能作为肾损害的判断指标之一。Perez等在研究MRL/lpr小鼠狼疮肾炎的发生和进展中发现肾组织中IP-10表达水平增加。Q Fu等研究显示SLE患者较RA患者和健康人的Mig转录水平明显升高，且SLE有LN者比无LN者升高。在MRL/lpr狼疮肾炎小鼠研究中发现肾组织中Mig基因及蛋白表达上调。越来越多的研究者认为，IP-10、Mig在LN的发病机制中起着重要作用。目前，国内外还未见IP-10、Mig在LN患者肾组织表达的研究。目的探讨IP-10和Mig在LN中的作用及意义，为LN发病机制的阐明、疾病活动性的判定及LN疾病的治疗等提供一定的理论依据。方法运用免疫组织化学的实验方法检测43例LN患者和9例正常对照者肾组织中IP-10和Mig的表达水平及分布情况，同时计算LN病理活动指数、肾小管间质病变评分及SLEDAI评分，收集LN患者24小时尿蛋白定量及血清肌酐水平的临床资料。研究IP-10和Mig在LN肾活检组织的表达情况及与肾组织病理指标（LN病理活动指数、肾小管间质病变评分）和临床指标（24小时尿蛋白定量、血清肌酐、SLEDAI）之间的相关性。结果1、正常对照组和LN组的肾组织中，IP-10在肾小球内基本未表达；正常对照组IP-10在小管间质区表达微弱（阳性目标积分光密度值2.57±1.64），LN组IP-10在小管间质区的表达明显升高（阳性目标积分光密度值12.55±6.16），差异具有统计学意义（p＜0.01），IP-10阳性染色区主要在近曲小管上皮细胞胞浆中；LN中，IP-10阳性染色强烈的肾间质区炎症细胞浸润显著，IP-10阳性染色较弱的肾间质区炎症细胞浸润不明显。2、正常对照组和LN组的肾组织中，Mig在肾小球内基本未表达；正常对照组Mig在小管间质区表达微弱（阳性目标积分光密度值7.57±2.35），LN组Mig在小管间质区的表达明显升高（阳性目标积分光密度值45.48±27.93），差异具有统计学意义（p＜0.01），Mig阳性染色区主要在近曲小管上皮细胞胞浆中；LN中，Mig阳性染色强烈的肾间质区炎症细胞浸润显著，Mig阳性染色较弱的肾间质区炎症细胞浸润不明显。3、LN肾小管间质区Mig的表达水平比IP-10明显升高，差异具有统计学意义（p＜0.01）； LN肾小管间质区IP-10的表达与Mig的表达呈显著正相关（r＝0.925，p＜0.01）。4、LN肾小管间质区IP-10的表达分别与LN病理活动指数、肾小管间质病变评分呈正相关（r＝0.594，p＜0.01；r＝0.744，p＜0.01）。LN肾小管间质区Mig的表达分别与LN病理活动指数、肾小管间质病变评分呈正相关（r＝0.632，p＜0.01；r＝0.852，p＜0.01）。5、IP-10的表达与24小时尿蛋白定量呈正相关（r＝0.693，p＜0.01），与SLEDAI呈正相关（r＝0.472，p＜0.01），与血清肌酐无明显相关性（r＝0.215，p＞0.05）。Mig的表达与24小时尿蛋白定量呈正相关（r＝0.723，p＜0.01），与SLEDAI 呈正相关（r＝0.549，p＜0.01），与血清肌酐呈正相关（r＝0.311，p＜0.05）。结论1、IP-10和Mig可能参与了LN肾小管间质损伤的病理过程，特别是Mig可作为预测肾功能损害进展的指标之一。2、IP-10和Mig与SLE疾病活动，尤其是狼疮肾活动密切相关，可能作为监测狼疮肾活动的指标。

Keyword ：

IP-10Mig狼疮肾炎免疫组化

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Abstract ：

目的 从系统生物学角度全面研究弥漫增生型狼疮肾炎(Ⅳ型LN)和膜型狼疮肾炎(Ⅴ型LN)患者血清细胞因子表达谱.方法 分离静脉血清,通过抗体芯片技术同时检测4种Th1和5种Th2细胞因子表达.结果 ①细胞因子表达谱:在检测的9种细胞因子中,Ⅳ型LN患者有7种明显升高,包括3种Th1细胞因子[干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α)]和4种Th2细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-13);而Ⅴ型LN仅有4种细胞因子表达上调(IL-2、IL-4、IL-10和IL-13).②相关性分析:Ⅳ型LN患者细胞因子与临床表现之间相关性较强,如IL-5与抗dsDNA抗体滴度及血肌酐呈正相关、与C3呈负相关;IL-10与系统性红斑狼疮(SLE)疾病活动指数(SLEDA1)呈正相关、与尿蛋白及血红蛋白浓度均呈负相关;IL-13与尿蛋白浓度呈负相关,IL-1与SLEDAI呈正相关、与血红蛋白浓度呈负相关.Ⅴ型LN患者仅IL-1与血肌酐之间呈正相关,IL-4与尿蛋白之间呈负相关.结论 不同病理分型的LN患者体内细胞因子表达谱不同,提示不同病理分型的LN其内在的免疫学发病机制存在差异,也提示不同的细胞因子表达可能代表不同类型的LN.

Keyword ：

狼疮肾炎 免疫 细胞因子类

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